عنوان : اندازه گيري HbA₂ در ناقلين مبتلا به تالاسمي مينور با روش كروماتوگرافي مايع با كارايي بالا ( HPLC )

نويسنده ، نويسندگان : دكتر محمد تقي حقي آشتياني - فاطمه برنجي تهراني

نشاني : دانشگاه علوم پزشكي تهران

مقدمه و اهداف :

از آنجائيكه اندازه گيري ميزان HbA2 در تشخيص بيماران ژنتيكي بتا تالاسمي حائز اهميت مي باشد بدين جهت براي اولين بار در ايران اقدام به اندازه گيري HbA2 به روش HPLC بر روي 50 فرد مبتلا به بتا لاسمي مينور نوديم . اندازه گيري مقدار بالاي HbA2 بطور وسيعي به تشخيص ناقلين بتا تالاسمي مينور كمك مي كند ، روش HPLC امروزه به دليل حساسيت در دقت و سرعت آناليز جهت اندازه گيري HbA2 وتشخيص ديگر هموگلوبينو پاتي ها كاربرد زيادي پيدا كرده است .

روش اجرا :

ابتدا از نمونه خون تمام افراد كه حاوي ضد انعقاد EDTA بود هموليزات تهيه و پس از رقيق نمودن آن را از ستون تعويض كاتيوتي ضعيف weakly cation exhange موسوم به Poly CATA عبور داده و توسط بافر با قدرت يوني متفاوت بطريق گراديانت كروماتوگرافي انجام گرديد . جذب نوري در طول درجه 405 nm توسط detctor تعيين شده واز نسبت مساحت HbA₀ به HbA₂ محاسبه ميزان HbA₂ ( % ) اندازه گيري گرديد كه زمان جداسازي HbA₂ كمتر از 10 دقيقه مي باشد . در اين مطالعه 50 فرد مبتلا به بتا تالاسمي مينور همراه با 50 نفر گروه كنترل ( افراد سالم بدون كم خوني ) مورد بررسي قرار گرفتند كه نتايج آن در قسمت نتيجه بررسي شده است .

نتايج :

متوسط CV در طول آزمايش ( within assay ) 1.6% و ربين آزمايش ( Between assay ) 4.9 % مي باشد دقت روش با 2 غلظت HbA₂ : 1.4 و : 45% HbA₂ بررسي گرديد كه CV در طول آزمايش within assay براي غلظت اول 0.92 و غلظت دوم CV : 1.6 % مي باشد ضمنا در مقايسه با روش كروماتوگرافي ميكروالكتروفورز بر روي استات سلولز يك ارتباط خطي r = 0.985 به وجود مي آيد .

هدف از اين تحقيق برپايي يك روش عملي سريع ، حساس ودقيق براي اندازه گيري HbA₂ توسط روش HPLC به وسيله ستون تعويض كايتول ضعيف مي باشد كه در اين سيستم جداسازي HbA₂ كه يك ماركر تشخيصي جهت بيماري بتا تالاسمي مينور مي باشد در كمتر از 10 دقيقه انجام مي گردد ، ضمنا نتايج حاصل از انجام HbA₂ به روش كروماتوگرافي ميكرو HPLC سرعت و تكرار پذيري در سيستم HPLC به مراتب لاتر مي باشد واز اين روش مي توان بعنوان يك روش سريع ، حساس و عملي در تعيين ميزان HbA₂ استفاده نمود . در كنار آن با تغيير گراديانت بافر نيز جداسازي ديگر هموگلوبين ما نير HbE, HbD, HbC, HbS, HbF, HbA₁C و ساير هموگلوبينها ميسر مي باشد .